乙肝药物研发实验，通过终点稀释法，确定一类新型抑制剂

韩国四所科研院校研究人员，在开发检测方法过程中，鉴定出了一种新的乙肝病毒抑制剂，并将研究成果发表在Antiviral Research。

简单来讲，韩国研究人员鉴定并发现一种α-2 肾上腺素受体激动剂——右美托咪定 (DMM)，在实验中，它在不干扰HBVDNA分泌的前提下，可抑制传染性病毒后代的分泌约6倍！

乙肝药物研发实验，通过终点稀释法，确定一类新型抑制剂

一、实验目的

韩国研究人员认为，定量传染性病毒颗粒是进行体外病毒学研究基础。为了确定体外含乙肝病毒（HBV）基因组颗粒的数量，使用定量PCR（qPCR）测量基因组当量（GEq）。然而，除了传染性病毒粒子以外，体外还会产生含有HBVDNA的非传染性HBV颗粒，这种背景下，可能导致在通过 qPCR分析时，高估传染性HBV颗粒的数量。

二、实验方法

因此，基于上述原因，韩国研究人员建立了一个终点稀释法，可以精确地确定传染性HBV颗粒的数量。基于HBV感染细胞模型测定使用384孔板格式，并能够以半自动式计算50%组织培养感染剂量（TCID50）。

细胞培养衍生的HBV（HBVcc），由稳定的HBV复制细胞（HepAD38）或HBV感染的HepG2-NTCP 细胞产生，以及来源患者的HBV血清被连续稀释并用于感染初始靶细胞。应用终点稀释试验，韩国研究人员用源自HepAD38-和 HepG2-NTCPsec + 细胞上清液的PEG 沉淀 HBV 感染 HepG2-NTCP 细胞，计算 TCID50/mL，转化为空斑形成单位 (PFU)，并产生特异性传染性（PFU/GEq 的比率）。

结果，计算出 HepAD38 和 HepG2-NTCPsec + 细胞上清液的 TCID50/mL 分别为 7.22×106 和 2.16×106，比感染力分别为 1/13,816 和 1/8798。通过免疫沉淀去除非感染性“裸露”颗粒后，特异性感染性进一步增加了大约2倍。

通过肝素柱纯化 HepAD38 细胞上清液后，TCID50/mL 和特异性感染率分别提高了18倍和15倍。有趣的是，来自两名未纯化患者的HBV血清具有1/88 和 1/3609 的特异性传染性。在将TCID50 转换为感染复数 (MOI) 值后，研究人员根据GEq 或 MOI 值用 HBVcc 接种 HepG2-NTCP细胞，并证明基于 MOI 的感染导致更可重复的感染率。

三、实验结论

此外，该测定使用连续稀释的拉米夫定（一种乙肝病毒复制抑制剂）进行验证，可抑制HBVDNA分泌和传染性病毒后代约分别是56倍和470倍。韩国研究人员发现，我们鉴定了右美托咪定 (DMM)，它是一种α-2 肾上腺素能激动剂，可以抑制传染性病毒后代的分泌约6倍，而不会干扰HBVDNA分泌。

综上所述，韩国研究人员这项科学实验的结果是，开发了一种适用于传染性HBV颗粒的标准定量检测方法，将右美托咪定 (DMM)鉴定为一种新型乙肝病毒抑制剂，它能够专门干扰传染性HBV颗粒的分泌，而并不会影响乙肝病毒基因组的分泌。

四、实验意义和药物开发前景

小番健康结语：总体来看，韩国四所科研院校研究人员的这项研究成果，要点包含两个方向，第一是开发这种终点稀释法，能够精确测定感染性HBV颗粒的数量，可以评估HBV颗粒的特异性感染性和稳定性；第二是，通过这种方法，鉴定出了一种新型HBV抑制剂（即右美托咪定 (DMM)，以往它主要作为α-2 肾上腺素受体激动剂），研究结果已发表在Antiviral Research。